1试剂准备

（1） 混合酸：80%的乙酸和69%的硝酸按10:1混合，具体做法：取25ml的量筒，按顺序加入4ml去离子水+16ml浓度为100%的冰乙酸+2ml浓度为69%的硝酸，移到指定锥形瓶摇匀；

（2） 17%NaOH溶液，具体做法：称17gNaOH+100ml去离子水，移到指定锥形瓶摇匀；

（3） 12%乙酸溶液，具体做法：取25ml的量筒，按顺序加入22ml去离子水+3ml乙酸，移到指定锥形瓶摇匀；

（4） 无水乙醇（≥99%），倒入指定锥形瓶待用；

（5） 丙酮，倒入指定锥形瓶待用；

（6） 去离子水，倒入指定锥形瓶待用.

2实验器材

（1） 通风橱；

（2） 烘箱：温度设置为50℃；

（3） 加热板：做实验前将温度调到120℃，预热30分钟；

（4） 离心机，至少3500rpm；

（5） 震荡器；

（6） 1.5ml聚丙烯离心管；

（7） 移液枪：0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml和0.5ml共五档；

（8） 医用注射器；

（9） 护目镜;

3样品要求

（1） 根据参考文献(Brendel et al., 2000; Evans and Schrag, 2004; Gaudinski et al., 2005)可知，0.5ml混合酸大概可处理10mg（最好不要超过20mg）样品;

（2） 样品必须为粉末状;

（3） 实验前请清洁好离心管盖；

（4） 每次试验准备好两组样品，每组最多20个.

4注意事项

（1） 由于实验室有大量试剂，离开前请务必关好门；

（2） 做实验前请打开通风橱；

（3） 做实验时请带好护目镜和手套；

（4） 做完实验后最好保持通风橱继续运行一段时间；

（5） 废液请移入指定收集瓶中，由化工院统一处理.

5实验流程：

步骤1：

1) 用移液枪给每个样品加入0.3ml（请根据实际需要加入试剂量）混合酸

2) 盖上扎好孔的盖子

3) 将样品放入120℃（绝对不能够超过130℃）加热板30分钟

步骤2：

1) 样品冷却5~10分钟

2) 加入0.3ml无水乙醇

步骤3：

1) 震荡混合均匀

2) 沉淀后轻轻倾斜试管，移去管壁残留样品

3) 离心5分钟

4) 移去尽可能多的液体

步骤4：

1) 加入2×0.3ml无水乙醇

2) 重复步骤3

步骤5：

1) 加入2×0.3ml去离子水

2) 重复步骤3

步骤6：

1) 加入2×0.3ml的17%NaOH溶液

2) 静置10分钟

3) 重复步骤3

步骤7：

1) 加入2×0.3ml去离子水

2) 重复步骤3

步骤8：

1) 加入2×0.3ml的12%乙酸溶液

2) 重复步骤3

步骤9：

1) 加入2×0.3ml去离子水

2) 重复步骤3

步骤10：

1) 重复步骤9两次

步骤11：

1) 加入2×0.3ml无水乙醇

2) 重复步骤3

步骤12：

1) 加入2×0.3ml丙酮

2) 重复步骤3

步骤13：

1) 将样品放入50℃的通风橱24小时

参考文献：

Brendel, O., Iannetta, P.P.M. and Stewart, D., 2000. A rapid and simple method to isolate pure alpha-cellulose. Phytochemical Analysis, 11(1), 7-10.

Evans, M.N. and Schrag, D.P., 2004. A stable isotope-based approach to tropical dendroclimatology. Geochimica et Cosmochimica Acta, 68(16), 3295-3305.

Gaudinski, J.B. et al., 2005. Comparative Analysis of Cellulose Preparation Techniques for Use with13C,14C, and18O Isotopic Measurements. Analytical Chemistry, 77(22), 7212-7224.